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    均相酶免疫检测技术

    1.技术简介

    均相酶免疫技术是一种基于液相均相体系的竞争性反应,兼具了“抗原和抗体”及“酶和底物”两种系统的特点,具有检测速度快、定量准确、精密度高、特异性强等优点。 同时可应用于各种类型的生化分析仪,实现样本的高通量和自动化测定,可用于检测治疗药物、兴奋剂、食品安全、农药残留等分子量在 2000 道尔顿以下小分子,也可用于多肽、蛋白质及多糖等大分子的检测,具有广泛的应用前景。

    2.技术原理

    HEIA 技术运用竞争结合的分析方法, 酶标记半抗原和非标记半抗原具有相同的与限量抗体竞争结合的能力。 抗体与酶标记半抗原结合后,形成空间位阻,封闭了酶与底物的结合位点,从而降低酶对底物的催化效率。 通过测定底物终端物的特定波长的吸光度变化,即可测定反应系统中总酶活性变化,推算出被测样本中半抗原含量。

    3.技术优点

    HEIA 发生在一个液相均相体系中,无需分离结合与游离的标记物,具有如下突出优点:

    1)特异性强、定量准确;

    2)灵敏度高,可达到 pg/mL 水平; 

    3)精密度高,批内、批间变异系数均小于 5%;

    4)检测时间短、通量高;

    5)操作简便、自动化程度高,可在开放式生化分析仪进行检测。

    4.技术难点

    研发难度大、研发周期长,研发成本高。

    5.技术对比


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    实例分析-甘胆酸均相酶免疫检测试剂

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    1. 甘胆酸小分子修饰与交联

     

    2. G6PDH的重组表达

    利用基因重组技术成功研发出高活性的重组 rG6PDH,使其与普通发酵提纯的G6PDH相比,有更高的活性和检测灵敏度。 

    - 常规酶灵敏度:  10 ng/ml

    - 重组酶免疫灵敏度 :  0.1 ng/ml 

    3. 甘胆酸衍生物与G6PDH交联


     
    由电泳图可知,GC-YS-BSA条带略高于BSA对照,所以GC-YS-BSA相对分子量大于BSA,证明有CG-YS交联到BSA上。

    4. 甘胆酸均相酶免疫试剂校准曲线


    5. 精密度及回收率

    由表可知,探生甘胆酸均相酶免疫试剂CV值<5%,说明试剂精密度好,回收率在95%-105%之间,说明试剂准确度高。

    6. 抗干扰实验

     

     选取51种常见药物,调整浓度至10.0μg/ml,进行干扰试验测定。由表可见,上述 51 种常见药物等价于甘胆酸的浓度均小于 0.1μg/ml。可见本试剂的抗体是抗甘胆酸的特异性抗体。

    7. 线性相关性

    由图表可知,和某知名均相酶试剂的线性相关性可达到0.99以上。

    8. 开瓶稳定性


    由表可知,低值50天的开瓶稳定性的CV值小于10%,中高值50天的开瓶稳定性的CV值小于5%,说明试剂稳定性好,优于大部分现有均相酶试剂。